ICS 17.180.99 N 52 JB 中华人民共和国机械行业标准 JB/T9358-1999 液相色谱固定波长（254nm） 试验方法 紫外吸收检测器 Test method for fixed wavelength(254nm) UV detector used in liquid chromatography 1999-08-06发布 2000-01-01实施 国家机械工业局 发布 JB/T9358-1999 前言 本标准是对ZBN52001一86液相色谱固定波长（254rm）紫外吸收捡测器试验方法》的修订：修订 时，对原标准作了编辑性修改，主要技术内容没有变化。 本标准自实施之日起，代替ZBN52001--86： 本标准的附录A是标准的附录。 本标准的附录B是提示的附录。 本标准由北京分析仪器研究所提出并归口。 本标准负责起草单位：北京分析仪器厂、北京分析仪器研究所、上海分析仪器厂、上海第三分析仪器 厂、四川分析仪器厂、天津大学： 本标准主要起草人：诸兆烨、张心怡、昊氧。 本标准于1986年6月首次发布： 中华人民共和国机械行业标准 液相色谱固定波长（254nm） JB/T9358—1999 紫外吸收检测器 试验方法 代替ZBN52001-86 Testmethod for fixed wavelength(254nm) UV detector used in liquid tchromatography 1范围 本标准规定了液相色谐固定波长（254nm）紫外吸收检测器的定义、试验条件、试验方法、试验报告、 极限状态下的性能试验、运输、运输史存基本环境试验等。 本标准适用于液相色谱仪专用的、固定波长（254nm）紫外吸收检测器（以下简称检测器）。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文，本标准出版时.所示版本均为 有效。所有标准都会被修订，使月本标准各方应探计使用下列标准最新版本的可能性。 JB/T93291999仪器仪表运输、运输存环境条件及试验方法 3定义 本标准采用下列定义 3.1吸光度absorbance 用人射光强度（1.）与光透过试样后的强度（I)之比的常用对数来表示。 A=lgi (1) 3.2吸光度单位absorbanceunit（AU） 它是吸光度的计量单位。当I，=0.1I.时，吸光度A等于1AU： 3.3检测器量程detectorspan 用AUFS表示：它表示记录器某量程的满标所代表的吸光度值： 3.4静态static 样品池内介质不流动。 3.5动态dyamic 样品池内充人溶剂，其流量为1ml/minc 3.6短期噪声，short-temnoise 每厘米池长中，平均每分钟内检测器信号随机变化的最大振幅，用N.表示，单位为AU/cm。 3.7实测短期噪声measuredshort-temnoise 未经池长折算的短期噪声。用N，表示，单位为AU 3.8长期噪声long-temnoise 每厘米池长中，每10min内检测器信号随机变化的最大振幅。用N，表示，单位为AU/cm。 3.9漂移drift 国家机械工业局1999-08=06批准 2000-01-01实施 JB/T93591999 单方向变化的基线的平均斜率，以1h测出的吸光度变化计算。用D表示，单位为AU/h。 3.10流量灵敏度flow-sensitivity 在检测器信号对流量变化的曲线中，流量等于Iml/min时的斜率。用S，表示，单位为AU·min/ml。 3.11上升时间risetime 在检测器的线性范围内，流动相组成阶式变化时，输出信号从10%变化到90%所经历的时间。单位 为s: 3.12最小检测浓度minimumdetectableconcentration 相当于两倍静态实测短期噪声的被检测特定试样的浓度。单位为g/ml。 3.13线性范围linear range 检测信号与被检测试样浓度的线性度在95%条件下，最大线性浓度（C，）与最小检溉浓度（C）之 .比： 4试验条件 4.1 试验环境 a! 环境温度：5℃~35℃： bi 周围空气相对湿度：不大于80%： 供电电源：电压220V±22V，频率50Hz±0.5Hz； d) 室内不得有易燃、易爆和强腐蚀性气体，并避免强烈机核振动和电磁于扰： ei 室内应避免空气对流和温度急剧变化； f 不允许日光直接照射到正在测试的检测器上。 4.2 溶剂和试剂 4.2.1必须采用新鲜的二次蒸馏水（以下简称水）。在水中可添加2%的异丙醇，以延长忙存时间： 4.2.2甲醇，异丙醇、丙醇、联苯和尿嘧啶等溶剂和试剂，一律不低于分析纯级。 4.2.3制备标准样品的溶液可用称量法或体积法。溶质称量的相对误差小于0.5%：稀释比不大于 100倍：最小被稀释量为0.5ml。 4.3输液系统 α）流量范围：不低于0.2ml/min~.6ml/min； b）流量算复性：优于±1%； c）最好能程序控制流量梯度和溶剂梯度。 4.4.记录器或数据处理系统 a）相应时间：不大于0.5s； b）走纸精度：优于+1%。 4.5校准用紫外分光光度计 a）波长范圈：220mm~350mm； b) 光谱宽度：2nm~8nm; c) 吸光度的测量精度：优于±1%； 波长精度：优于±0.75mmc 5试验方法 试验程序除5.1吸光度的校准必须先做以外，其它试验可根据具体情况灵活安排。 5.1.吸光度的校准（见图1) 5.1.1溶液 JB/T93581999 甲溶液—2%异丙醇的水溶液。 乙溶液一—丙酮和甲溶液的混合液，丙酮含量为0.12%~0.15% 5.1.2在分光光度计上，以甲溶液为空白，测量254nm波长处乙溶液的吸光度A。。 5.1.3在输液系统和检测器之间连接一不锈钢蓄（一般长200mm~30mm.内径为0.1mm~0.25mm）。 流量为6mi/min，按阶式变化分别把甲溶液和乙溶液输送到检测器，在记录议上得到阶式信号A.，单位为 AU. 甲落液100% A, 乙溶液100% 图1吸光度的校准 5.1.4计算 Ab1 校准值：A。 (2) AL-A 相时误差： (3) ×100% A: 式中：b。- 一校准分光光度计上测量池的试样液层泽度.CrI: b：一一被测测器流动池的试样液层厚度，cme 5.2静态和动态下噪声和漂移 5.2.1在静态下测量时，先用空气和氮气冲洗样品池。 在动态下测量时，则用甲醇反复冲洗样品池及其连接管，至除云其它溶剂、可溶物和空气为止。 若有参比池则充人空气或氮气，以确保参比池洁净。 注：甲募必须经过熏增和过滤。 5.2.2启动检测器，从制遗广规定的稳定时间结束时起进行测量：记录检测器最灵敏档的基线，不少于 1h：在此期间室温变化不得超过+2℃。 5.2.3在动态下测量时，将输液系统连接粒度为5u或10u的ODS柱，然后再接检测器。以流量1mi/min的 甲醇溶液泵入检测器，重复5.2.2步骤，记录它在动态时的基线，以测量检测器在动态下的噪声和漂移， 5.2.4计算 5.2.4.1短期噪声的计算 如图2所示，面数对平行线，每一对相当于1/2min~Imin长度，以构成15min内信号的包络。面平行 线时，应使两线距离最短。按吸光度单位测量各平行线间的纵向距离（Y，）。按公式（4)计算便得到检测器 的静态（或动态）短期噪声。 (4) JB/T9358-1999 (X; = 1/2min ~ lmin) 图？短期噪声的测量图例 5.2.4.2长期噪声的计算 如图3所示，标出15min短期噪声期间每段包络的中点。在这些中点两侧画一系列平行线，每一对平 行线相当于10min长度，选出最大的纵向距离，用池长除此距离便得到静态（或动态）下的长期噪声。 V/=z/b (5) 10min 10min 10min 图3静态（或动态）长期噪声的测量图例 5.2.4.3静态（或动态)漂移的计算 如图4所示.在记录的基线上绘制纵向距离最短的一对平行线，该平行线斜率即为检测器在静态（或 动态）下的基线的漂移。 D' (6) 吸光度(ACL) 1h 图4漂移的测量图例 5.3流量灵敏度 5.3.1待检测器稳定后，以甲醇为溶剂（不接色谱柱），流量分别在0.5ml/min，1.0ml/min，2.0ml/min， 3.0ml/min和4.Oml/min下进行测量，并选择适当的量程，得到如图5的记录。 JB/T9358—1999 各流量保持时间根据基线稳定情况确定。 5.3.2计算 根据图5的测量结果，绘制以流量为横坐标，检测器信号变化的绝对值为纵坐标的流量灵敏度曲线 图。在1ml/min处画一切线（见图6)所得斜率即为该检测器的流量灵敏度。 (吸光度(AU)×10*4 35 30 25 20 15 10 时间(min) 0 10 25 图5 流量灵敏度的测量图例 1吸光度(AC)×10** 30 f: 20 1ml/min 时的切线 f 流量(ml/min) 1 2 3 4 图6流量灵敏度计算图例 (7) 2.0 5.4上升时间（见图7) 5.4.1在输液系统和检测器之间串接一个定量管进样阀。定量管的容积至少要大于检测器从入口至出 口总容积的三倍至五倍。 5.4.2 用甲醇作溶剂，用联苯（2×10-g/ml~4×10g/ml）或尿嘧啶（8×10~g/ml~10×10-°g/ml）作为 溶质。 5.4.3 把流量调到2ml/min 5.4.4 利用定量管进样，获得流动相组成的阶式变化，用记录器记录检测器的输出信号。 5.4.5然后在3ml/min的流量下测量。如果所得时间缩短，则还应在更商的流量下