ICS 37.040.30 G 84 HG 备案号：20523—2007 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 2535—2007 代替HG/T2535—93 照相化学品 增感染料含量的测定 反相高效液相色谱法 Photographic chemicals The method for the determination of sensitization dyes Reversed phase high performance liquid chromatography 2007-10-01实施 2007-04-13发布 中华人民共和国国家发展和改革委员会 发布 HG/T2535—2007 前言 本标准是在1993年行业标准HG/T2535一93《照相化学品 增感染料含量的测定 反相高效液 相色谱法》的基础上修订的。本标准自发布之日起代替HG/T2535一93。 本修订版标准在内容上与前一版本相比，主要包括以下变化 对色谱分离条件进行了优化； 试验样品由BD-01、BD-04、BD-06、BD-10代替样品SG-03、SB-16、SB-02、SR-03 。 本标准由中国石油和化学工业协会提出。 本标准由全国感光材料标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：沈阳感光化工研究院。 本标准主要起草人：张平、鄂春晖、瀚真萍。 本标准所代替标准历次版本发布情况为： HG/T2535—93。 I HG/T2535—2007 照相化学品增感染料含量的测定 反相高效液相色谱法 1范围 本标准规定了反相高效液相色谱法测定增感染料含量的方法。 本标准适用于醇溶性的、有紫外可见吸收的增感染料。 2提要 称取样品、溶解，用微量注射器或定量进样阀将样品溶液注入色谱柱进行分离，用指定波长的紫外 可见波长检测器检测，用面积归一法或外标法计算增感染料的含量。 3试剂与标准品 3.1甲醇：色谱纯。 3.2乙酸铵：分析纯。 3.3水：新鲜二次蒸馏水，再经0.45μm滤膜过滤。 3.4标准品：增感染料的标准品的主体含量不得低于99.0%，用于外标法定量分析的标准品需由感光 材料与照相化学品检测中心认定。 4仪器与设备 4.1高效液相色谱（配有紫外可见光检测器）。 4.2分析天平：感量为0.1mg。 4.3过滤装置（配有0.45μm有机及水相滤膜）。 5推荐色谱操作条件 色谱操作条件主要由色谱柱、流动相、检测波长、检测灵敏度、流速、柱温等因素组成。所选择的色 谱条件应该使增感染料样品中所有组分完全分离，需梯度洗脱，主成分的色谱保留时间为5min～ 20min，总的洗脱时间一般不超过30min。在满足上述要求的基础上，尽量选用通用性强的色谱柱和试 剂组成相对简单并易得易处理的流动相，尽可能地简化操作。常用增感染料的色谱操作条件如下。 色谱柱：ZorbaxEclipseXDB-C185μm4.6mmX150mm（或相当型号色谱柱）。 流动相：溶剂A：0.01mol/L乙酸铵水溶液。 溶剂B：甲醇。 梯度洗脱：流速：1mL/min。 柱温：30℃ 检测波长：254nm（或根据需要确定）。 1 HG/T2535—2007 增感染料BD-01洗脱程序 增感染料BD-04洗脱程序 时间 A% B% 流量(mL/min) 时间 A% B% 流量（mL/min） 0. 0 55 45 1 0. 0 60 40 1 9. 5 30 70 1 8. 5 30 70 1 11. 5 30 70 1 11. 0 30 70 1 15. 0 10 06 1 14. 0 10 90 1 19. 0 10 90 1 19. 0 10 90 1 20. 0 55 45 1 20. 0 60 40 1 增感染料BD-06洗脱程序 增感染料BD-10洗脱程序 A% B% 流量(mL/min) 时间 A% B% 时间 流量（mL/min） 0. 0 60 40 1 0. 0 55 45 1 9. 5 30 70 1 9. 5 30 70 1 11. 5 30 70 1 10. 0 30 70 1 15. 0 10 90 1 15. 0 10 90 1 19. 0 10 90 1 16. 0 10 90 1 20. 0 60 40 1 17. 0 55 45 1 对不同的液相色谱仪和不同生产厂的色谱柱，上述参数可作适当调整，以获取适宜的色谱分离度。 常用增感染料的分离色谱图见图1图4。 VWD1 A. Warelength=500 nm(LAD10097.D) mAU 8S221 80 60F 8.575 15.950 40h 20H 图1 选用500nm检测波长分离BD-01样品的色谱图 VWD1 A. Wavelength=254 nm(LA010082.D) mAU 80 60 40 10.724 20 66L 2 4 6 o 10 12 16 18 min 图2 选用254nm检测波长分离BD-04样品的色谱图 2 HG/T2535—2007 VWD1 A. Wavelength=254 nm(LA010258.D) mAU 40H 30 20 10F 4.614 .862 -10% min 图3选用254nm检测波长分离BD-06样品的色谱图 VWD1 A. Wavelength=254 nm(LA010265.D) mAU 70 60 50 40 30 20 >6.615 10 ot- 12 图4选用254nm检测波长分离BD-10样品的色谱图 测试步骤 -般采用面积归一法，当含量测定值低于90%，或对其测定结果有疑义时，则用外标法进行仲裁 分析。 本实验规定的样品（包括标准品）的称样量由样品溶液的进样量、色谱柱负荷、杂质峰检测限、检测 器灵敏度等共同确定。 6.1面积归一法 6.1.1样品溶液的配制 称取一定量样品，精确至0.1mg，用甲醇溶解并定容至10mL，用0.45uμm有机滤膜过滤后并用黑 纸包上待测。常用增感染料样品称样量见表1。 表 1 常用增感染料样品称样量 样品名称 BD-01 BD-04 BD-06 BD-10 称样量/mg 5 5 5 5 6.1.2测定 根据被测样品所要求的色谱条件调试高效液相色谱仪，并使其稳定。注入规定量的被测样品溶液 进行色谱分离，得色谱图。常用增感染料样品溶液的进样量见表2。 表2常用增感染料样品溶液进样量 样品名称 BD-01 BD-04 BD-06 BD-10 进样量/μL 10 10 10 10 HG/T2535—2007 6.1.3增感染料含量 按式（1)计算： A, X100 (1) ZA. 式中： X，一一被测样品中增感染料的百分含量，单位为百分数（%）； A,—被测样品中增感染料的峰面积； A,被测样品中各组分峰面积之和。 6.1.4允许差 本方法平行测定两次，取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果之差不得 大于1.0%。 6.2外标法 6.2.1标准溶液的配制 称取一定量标准品，精确至0.1mg，用甲醇溶解并定容至25mL，用0.45μm有机滤膜过滤后并用 黑纸包上待测。常见增感染料样品称样量见表3 表3常用增感染料样品称样量 样品名称 BD-01 BD-04 BD-06 BD-10 12.5 称样量/mg 12. 5 12.5 12.5 本实验规定的样品（包括标准样品）的称样量由样品溶液的进样量，色谱柱负荷，杂质峰检测限，检 测器灵敏度共同确定。称样量可以根据不同型号色谱仪作适当地调整。 6.2.2样品溶液的配制 按6.2.1规定的称样量和配制方法配制样品溶液。 6.2.3测定 根据被测样品所要求的色谱条件调试高效液相色谱仪，并使其稳定。依次分别注人规定量被测增感 染料的标准溶液，样品溶液进行色谱分离，得其各自色谱图。常用增感染料样品溶液的进样量见表4。 表4常用增感染料样品溶液（对应的标准溶液)的进样量 样品名称 BD-01 BD-03 BD-04 BD-06 进样量/μL 10 10 10 10 6.2.4结果计算 增感染料含量按式(2)计算 A,M,P "X (2) A,M2 式中： X2一一被测样品中增感染料的百分含量，单位为百分数（%）； A，一一两次被测增感染料标准品溶液主峰面积的平均值； Az- 一两次被测增感染料样品溶液主峰面积的平均值； M,——被测增感染料标准品的质量，单位为毫克（mg）； M2——被测增感染料样品的质量，单位为毫克（mg）； P——被测增感染料标准品的含量，单位为百分数（%）。 6.2.5允许差 本方法平行测定两次，取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果之差不得 4 HG/T2535—2007 大于1.5%。 7 试验报告 试验报告应包括下列内容： a) 有关样品的全部资料：样品批号、生产日期、测定时间。 b) 试验使用的仪器型号。 分析结果。 c) d) 在测定中观察到的异常现象。 e) 任何不包括在本标准中的操作或自由选择的试验条件。 L