ICS 67.050 CCS X 62 团 体 标 准 T/ NAIA 0200—2023 葡萄酒中多种有机酸的测定 高效液相色谱法 Determination of many organic acids in wine by HPLC 2023-04-10发布 2023-04-17实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0200—2023 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监管重点实验室（枸杞和葡萄酒 质量安全） ）、宁夏工商职业技术学院、宁夏回族自治区食品质量监督检验二站、宁夏化学分析测 试协会。 本文件主要起草人：汤丽华、马雪梅、辛世华、王泽岚、龚慧、马桂娟、赵瑞、王琛、李强 、 郭阳、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0200—2023 葡萄酒中多种有机酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了葡萄酒中柠檬酸 、酒石酸、D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的液相色谱检测方法 。 本文件适用于葡萄酒中柠檬酸、酒石酸、 D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的定性和定量测定 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.157食品中有机酸的测定 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 15038葡萄酒、果酒通用分析方法 SN/T 4675.5出口葡萄酒中有机酸的测定 离子色谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样用水稀释后 ，经反相色谱柱分离 ，以保留时间定性 ，用高效液相色谱仪测定和确证 ，外标 法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 磷酸 5.1.3 磷酸二氢钾 5.1.4 0.02mol/L 磷酸二氢钾溶液： 准确称取 2.72g磷酸二氢钾， 用水定容至 1000mL，磷酸调 pH2.6，混匀，微孔滤膜过滤。 5.2 标准品 5.2.1标准品：柠檬酸（ Citric Acid，CAS号77-92-9，C6H8O7）、酒石酸（ Tartaric acid，CAS号 133-37-9 ，C4H6O6）、D-苹果酸（ D-malic acid，CAS号636-61-3 ，C4H6O5）、琥珀酸 (Succinic Acid，CAS号110-15-6，C4H6O4)、乳酸 (lactic acid，CAS号50-21-5，C3H6O3)、乙酸 (Acetic Acid， CAS号64-19-7，CH3COOH) ，纯度均 ≥99%。 5.2.2混合标准储备液 ：准确称取适量的标准品， 用水配制成浓度为 1.0g/L的混合标准储备液， 4℃ 保存。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0200—2023 5.2.3 混合标准工作液：分别吸 取混合标准储备液 100μL，200μL，500μL，1.0mL，2.0mL， 4.0mL，500μ L用水定容至 10.0mL，制成浓度为： 0.01g/L、0.02g/L、0.05g/L、0.10g/L、0.20g/L、 0.40g/L、0.50g/L混合标准工作液，临用现配。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪 (HPLC)：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.1mg和0.01g。 6.3 高速均质器。 6.4 超声波清洗器。 6.5 水相型微孔滤膜： 孔径 0.45μm。 7 分析步骤 7.1试样制备 取代表性样品摇匀分装，利用高速均质器混合均匀，密闭常温或冷藏保存。 7.2试液的提取 准确吸取试样 10.0mL置于 100mL容量瓶中 ，超声 10min，加水定容至刻度 ，混匀，经0.45μ m 微孔滤膜过滤后，上机待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1 色谱柱： SB-Aq色谱柱， 4.6*250mm ，5μm，或性能相当。 7.3.2 流动相： 0.02mol/L磷酸二氢钾溶液。 7.3.3 流速： 0.5mL/min 。 7.3.4 检测波长： 210nm。 7.3.5 进样量： 20μL。 7.3.6 柱温： 30℃。 7.4校准曲线的绘制 将混合标准工作液 按浓度由低到高的顺序各取 20L分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积， 以校准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。 7.5试液的测定 将试液注入液相色谱仪中 ，得到峰面积 ，根据校准曲线得到待测液中有机酸的质量浓度 ，在上 述条件下，有机酸 的色谱图参见附录 A。 8 分析结果的表述 试样中有机酸含量按式（ 1）进行计算： 式中： X ──试样中有机酸含量，单位为克每升（ g/L）； ）（ 1          mV CX 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0200—2023 C ──试液测定浓度，单位为克每升（ g/L）； V ──试样溶液提取体积，单位为毫升（ mL）； m ──试样体积，单位为毫升（ mL）。 注：测定结果用平行测定的算数平均值表示，保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 10 定量限 当取样量为 10mL，定容体积为 100mL，方法的定量限为 0.01 g/L。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0200—2023 附录 A (资料性附录 ) 柠檬酸、酒石酸、 D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的色谱图 图A.1 柠檬酸、酒石酸、 D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的色谱图 全国团体标准信息平台