SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3256—2012 出口牛奶中-内酰胺类和四环素类药物 残留快速检测法 ROSA 法 Determination of β-lactams and tetracyclines residues in export milk- ROSA method 行业标准信息服务平台 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3256—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局， 本标准主要起草人：林杰、黄晓蓉、郑晶、黄嫦娇、陈彬、张体银、江树勋、陈健。 行业标准信息服务平台 SN/T3256—2012 出口牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物 残留快速检测法ROSA法 1范围 本标准规定了出口牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物残留的ROSA筛选检测方法。 本标准适用于出口牛奶中β-内酰胺类（包括青霉素G、阿莫西林、氨芋西林、苯唑西林、邻氯青霉素、 快速初筛测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 ROSA检测方法是应用ROSA分析仪测定药物残留的方法，该方法是基于胶体金免疫技术。试剂 条胶体金结合垫上包被微生物受体抗体胶体金复合物，检测线分别包被青霉素G抗原和金霉素抗原， 控制线包被微生物受体二抗。当样品中含有β-内酰胺类和四环素类药物时，会与检测线包被抗原竞争 结合金标复合物，金标复合物与检测线包被抗原结合形成红色线，未与检测线包被抗原结合的金标复合 物移动到控制线与第二抗体结合形成红色线。检测线显色的强度与样品所含药物浓度成反比，检测线 浅于控制线为阳性；检测线深于或等于控制线为阴性，控制线不全或没有颜色为无效检测。 信息服务平台 4试剂 牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物残留测定试剂盒（参见附录） 5设备和材料 5.1ROSA分析仪。 5.2ROSA温育器：56℃±1℃。 5.3冰箱：2℃~8℃。 5.4移液枪：300μL。 6样品保存 牛奶在冰箱4℃士1℃冷藏保存。 SN/T 3256—2012 7操作步骤 7.1ROSA温育器恒温至56℃士1℃。 7.2取试剂条，打开温育器盖子，将检测条放在温育器内，将试剂条上的塑料膜小心揭开至白线位置。 7.3将牛奶样品充分摇勾，用移液器取300μL土15μL牛奶样品，从试剂条的加样槽边缘小心地加入 样品。 7.4将塑料膜盖回，将温育器盖子盖上，温育器自动开始8min倒计时。 7.58min温育完成后，温育器发出蜂鸣声，取出试剂条。 8 结果判定 8.1目视比色 取出后观察C线和T线的颜色深浅，按照以下条件判定结果： a）T线浅于C线为阳性； b）T线深于或等于C线为阴性； C线不全或没有颜色为无效检测。 8.2ROSA分析仪读数 参照附录B的步骤初始化仪器，然后将检测条插人仪器的读数室，按Enter键开始读数，约11s 后，显示以下结果： a）显示的值为正数，即为阳性结果； b) 显示的值为负数，即为阴性结果 9试剂验收 新试剂盒使用前应先确认试剂条的有效性。首先使用青霉素G标准品和去离子水配制100ug/L 总服务平台 的标准溶液，再用阴性牛奶配制成青霉素G浓度为3ug/L的溶液，按以上步骤测定，如果测定结果阳 性证明试剂有效可用，如果测定结果阴性证明试剂失效不可用。 10确证 本方法为初筛方法，阳性结果应用其他方法进行确证。 11检测限 见表1。 2