SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4616—2016 国境口岸巴尔通体PCR检测方法 Detection with PCR for Bartonella at frontier port 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4616—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局、军事医学科学院微生物流行病研 究所。 本标准主要起草人：瀚文东、付维明、程成、焦丹、杨芳、徐宁、耿聪、杨德文、孙毅 行业标准信息服务平台 1 SN/T4616—2016 国境口岸巴尔通体PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸巴尔通体的检验对象、方法、生物安全要求及结果判定。 本标准适用于国境口岸人、医学媒介生物（蜱、蚤等）、宿主动物中巴尔通体的PCR方法检测。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 WS/T230 临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 巴尔通体Bartonella 一属寄生于脊椎动物红细胞内的革兰染色阴性杆菌，可引起人类卡里翁病（Carrion'sdisease）、猫 抓病（Cat-sratchdisease，CSD）、战壕热（Trenchfever）、心内膜炎、杆菌性血管瘤（Bacillary angiomatosis，BA）等多种疾病。 注：目前发现的巴尔通体有20余种，8种致病菌，除B.bacilliformis，B.quintana的宿主是人类，其余均寄生于自然 界动物体内，并经吸血节肢动物传播 4检测对象 4.1 疑似感染巴尔通体的受染嫌疑人、宿主动物的血液样本 服务平台 4.2 从出人境交通工具、集装箱及口岸地区等场所采集疑似感染巴尔通体的医学媒介生物（蚤、蜱等）。 生物安全和PCR防污染要求 5.1 检测工作中的个人防护参照GB19489 5.2 进行标本检测的实验室应符合GB19489生物安全二级实验室要求。 5.3 使用过的实验用品应按照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。 9 仪器和耗材 本方法使用的主要仪器和设备如下： 1 SN/T 4616—2016 扩增仪； 生物安全柜； 高速台式离心机（最高离心力12000g以上）： 台式离心机（最高离心力2000g以上）； 漩涡振荡器； 恒温水浴锅； 高压灭菌锅； 低温冷藏、冷冻冰箱； 微量可调移液器（10μL，100μL，200μL，1000uL）及配套带滤芯吸头； Eppendorf管； 螺口塑料管。 7 主要试剂 7.1 除另有规定外，所有化学试剂均采用分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。 7.2 核酸提取试剂：天根生化科技（北京）有限公司生产的细菌DNA提取试剂盒。 7.3 PCR反应试剂如下： a) 10XPCR缓冲液(Mg²+plus) b) dNTP(10 mmol/L) c)Taq酶(5 U/μL) d) 阴性对照品（灭菌双蒸水ddH，O） e) 阳性对照品（阳性的巴尔通体） 以上试剂也可由商品化试剂盒提供。 7.4日 电泳缓冲液（10XTBE）制备方法如下： 称取108gTris碱，7.44gNa,EDTA·H,O和55g硼酸，溶于800mL的ddH,O中，充分搅拌溶 解后加水定容至1L，室温保存。 7.56XLoading缓冲液(EDTA30 mmol/L,Glycerol 36%,Xylene Cyanol FF 0.035%,Bromophenol 0.05%)。 6GoldView核酸染料：使用浓度为0.05μL/mL。 7.6 示准信息服 8检测程序 8.1样本的采集、运送及保存 8.1.1血液样本 采集宿主动物或人全血标本，应常规无菌采集EDTA抗凝的血液样本至少1mL,4℃保存。样本 运输采用冰壶加冰或泡沫盒加冰密封运输。对于24h内不能立即检测的样本，一周内检测可保存于 一20℃冰箱，如超过一周无法检测的样本应保存于一70℃及以下温度冰箱。 8.1.2节肢动物及啮齿动物组织样本 将采集的蜱直接装入2mL螺口塑料管内，成蜱独立分装，若蜱或幼蜱按10只一组分装，在管壁上 1）给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可和推荐。如果其他等效产品具有相同的 效果，则可使用这些等效产品。 2