SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3306.8—2017 国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法 第8部分：基孔肯雅病毒 Loop-mediated isothermal amplification detection method at frontier port- Part 8:Chikungunya virus 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3306.8—2017 前言 SN/T3306《国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法》分为14个部分： 第1部分：鼠疫杆菌； 第2部分：产毒素霍乱弧菌； 第3部分：志贺氏菌； 第4部分：嗜肺军团菌； 第5部分：布鲁氏菌； 第6部分：黄热病毒； 第7部分：猴痘病毒； 第8部分：基孔肯雅病毒； 第9部分：结核分枝杆菌； 第10部分：炭疽芽孢杆菌； 第11部分：副溶血性弧菌； 第12部分：空肠弯曲菌； 第13部分：症原虫； 第14部分：大肠杆菌0157：H7。 本部分为SN/T3306的第8部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局广东国际旅行卫生保健中心中华人民共 和国汕头出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：李小波、李燕、朱俊贤、张显光、郑夔、师永霞、黄吉城、戴俊、苏锦坤 行业标准信息服务平台 1 SN/T 3306.8—2017 国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法 第8部分：基孔肯雅病毒 1范围 SN/T3306的本部分规定了国境口岸入出境人员感染及口岸蚊媒携带基孔肯雅病毒环介导恒温 扩增（LAMP)法核酸检验规程，包括样本采集、处理、检验程序、方法，结果判定及报告。 本部分适用于人出境口岸人员感染及蚊媒携带基孔肯雅病毒的实验室快速检验。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T2300一2009国境口岸蚊类携带基孔肯雅病毒的检测方法 SN/T3560一2013国境口岸黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒的多重实时荧光 RT-PCR检测方法 人间传染的病原微生物名录[卫科教发（2006)15号］ 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 基孔肯雅病毒chikungunyavirus 种属于披膜病毒科甲病毒属，基因组为单股正链RNA的病毒，病毒颗粒呈球形，有包膜，平均直 径42nm，相对分子质量为4,3×10°，沉降系数为46S。该病毒感染人可引起基孔肯雅热，主要临床表 现为发热、关节疼痛、皮疹和轻度出血等。 3.2 环介导恒温扩增检测方法loop-mediatedisothermalamplificationdetectionmethocl 一种新的恒温核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换 服务平台 比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 LAMP：环介导恒温扩增（Loop-mediatedisothermal amplification） F3：LAMP反应正向外引物（Forwardouterprimer） B3：LAMP反应反向外引物（Backwardouterprimer） FIP：LAMP反应正向内引物（Forwardinnerprimer) BIP：LAMP反应反向内引物（Backwardinnerprimer） 1 SN/T 3306.8—2017 5仪器和设备 仪器和设备如下 生物安全柜； 高压灭菌器； 普通冰箱； 水浴锅或金属浴； 冷冻离心机（带密封的离心安全杯）。 6试剂和引物 6.1 1试剂 需要如下试剂： 市售商品化核酸提取试剂如QIAGEN公司的RNA提取试剂盒!； BstDNA聚合酶； 市售商品化LAMP专用反应试剂RM2； 市售商品化逆转录试剂如PrimeScriptTMRTreagentkit逆转录试剂盒3； 灭菌双蒸水。 6.2LAMP检测的引物 引物组合序列如下： F3:5'-CGCCCTCTTTAACGGACATG-3" B3:5'-AATTCGGCGCTGGCTAAG-3' FIP:5'-TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATA-TACCAGCCTGCACCCATT-3' BIP:5′-AGTGTGCGGTGCATTCGATGA-TGCAGCTGAGAATTCCCTTC-3" 7样本采集 7.1 1人血液样本采集按SN/T3560—2013相关内容进行。 雅信息服务平台 7.2蚊虫样本采集按SN/T2300—2009相关内容进行。 8样本处理 8.1 血样样本处理按SN/T3560—2013相关内容进行。 8.2 蚊虫样本处理按SN/T2300—2009相关内容进行。 8.3 RNA提取按照试剂盒说明书进行。 9LAMP检测 9.1 cDNA模板制备 1),2).3) 由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效 产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2