SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4538.2—2016 商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺 方法二 Commercial kit methodMelamineTest method I 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4538.2—2016 前 言 本部分为SN/T4538《商品化试剂盒检测方法 长三聚氰胺》的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分包括两个方法：第一法酶联免疫吸附法；第二法胶体金法。检测时，应根据检测对象及 其限量的规定，选用与其相适应的检测方法。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中国农业大学、北京维德维康生物技术 有限公司。 本部分主要起草人：刘旭辉、沈建忠、吴小平、张朝晖、刘萤、云环、崔凤云、江海洋。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4538.2—2016 商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺 方法二 1范围 SN/T4538的本部分规定了出口原奶和奶粉中三聚氰胺的两种快速检测方法，即酶联免疫吸附法 和胶体金法。 本部分适用于原奶和奶粉中三聚氰胺的常规快速检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3第一法酶联免疫吸附法 3.1原理 本方法的测定是基于竞争性酶联免疫反应。样品中的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞 争抗三聚氰胺抗体，加入酶标Ⅱ抗工作液催化底物显色，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，三聚氰胺 浓度与吸光值成反比，按绘制的校正曲线进行定量计算。 3.2试剂和材料 3.2.2 三聚氰胺酶联免疫试剂盒（参见附录A） 准信息服务平台 3.3 仪器和设备 3.3.1 酶标仪（检测波长450nm，参考波长630nm 3.3.2 旋涡振荡器。 3.3.3 多道移液器：300μL。 3.3.4 单道移液器：200μL、1000μL和5mL。 3.3.5天平，感量0.001g。 3.3.6具塞离心管：50mL。 3.3.7具塞离心管：2mL。 3.3.8 计时器。 1) 给出该信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有 不同，需经实验评估后采用。 1 SN/T 4538.2—2016 3.4试样制备 3.4.1原奶 量取10mL样品于离心管（3.3.6）中，平衡至室温，待检。 3.4.2奶粉 称取1g（精确至0.01g）样品于离心管（3.3.6)中，加6mL去离子水，旋涡振荡至奶粉完全溶解；取 500L溶解后的样品于另一只离心管（3.3.6）中，加入500μL样品稀释液L参见附录A中f，旋涡振 荡30S，待检。 3.5酶联免疫吸附法测定 3.5.1测定条件 3.5.2测定步骤 将适当数量的微孔条L附录A中a）插人框架，分别在微孔中加人50μL的6个浓度的标准品溶液 （0μg/L、10μg/L、30μg/L、90μg/L、270μg/L、810μg/L)[附录A中b)］和制备好的试样，记录加样位 置；在每个微孔中加入50μL的三聚氰胺抗体工作液L附录A中d），盖上盖板膜，轻轻振荡酶标板 10s，充分混匀，避光反应30min；弃掉板中液体，用洗涤液［附录A中g)洗板4次，将酶标板倒置于吸 水纸上，拍干；在各微孔中加入100uL酶标Ⅱ抗L附录A中e）」，盖上盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充 分混匀，避光反应30min；弃掉板中液体，用洗涤液[附录A中g)洗板4次，将酶标板倒置于吸水纸上， 混匀，避光反应15min～20min；揭开盖板膜，在各孔中加入50μL终止液[附录A中i)轻轻振荡酶标 板10s；用酶标仪（3.3.1）在双波长450nm（测定波长）和630nm（参比波长）下检测吸光度，结果在终止 后5min内读取。 3.5.3平行试验 按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行平行试验测定。 3.6 结果计算 各标准品（或样品）的平均吸光度值，除以浓度为0ug/L的标准品吸光度值，乘以100%，可以得到 服务平台 各标准品的相对吸光度值（%），结果按式（1)进行计算： X 100% .(1) 式中： A，一一相对吸光度值，%； B一为标准（试样）溶液的吸光度值； B。——空白（Oug/L的标准品溶液）的吸光度值 以各标准品相对吸光度值为纵坐标（%），三聚氰胺标准溶液浓度（ug/L)的自然对数值为横坐标， 绘制半对数坐标系统曲线图。每次试验均应重新绘制标准曲线，参见附录B。从标准曲线上得出样品 相对吸光度值（A，）对应的试样浓度（ug/L)乘以稀释倍数得到原奶样品的浓度。奶粉样品的浓度值按 照式（2)进行计算： 2