SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2609—2010 国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒 的酶联免疫吸附试验检测方法 Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of influenza virus parainfluenza virus,respiratory syncytial virus 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2609—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、中华人民共 和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：孙肖红、王建军、张琳、杨宇、张乐、张晓龙、刘岚、黄晶晶、胡孔新、王静。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2609—2010 国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒 的酶联免疫吸附试验检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒抗体（IgG/IgM）的检测对象及 方法。 本标准适用于国境口岸人出境人员、可疑流感病毒或呼吸道合胞病毒感染者等人群的流感病毒、副 流感病毒、呼吸道合胞病毒抗体（IgG/IgM）检测的酶联免疫吸附试验，其他人群的抗体检测也可参照。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 甲型流感病毒influenzavirusA 甲型流感病毒是八节段RNA病毒，属正粘病毒科，感染人可引起流感。 3.2 乙型流感病毒influenzavirusB 乙型流感病毒是八节段RNA病毒，属正粘病毒科，感染人可引起流感 3. 3 副流感病毒parainfluenzavirus 副流感病毒属副粘病毒科，基因组为单股负链RNA，感染人可引起普通感冒气管炎和肺炎。 3.4 呼吸道合胞病毒respiratorysyncytialvirus，Rs 呼吸道合胞病毒属副粘病毒科，基因组为单股负链RNA，是世界范围内婴幼儿病毒性下呼吸道感 染最重要的病毒病原。 3.5 酶联免疫吸附试验enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA 本标准采用间接法，其原理是在固相包被板上包被抗原，用特异性抗人IgG/1gM的酶标二抗检测 结合到包被板上的样品中的特异性IgG/IgM抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与样品中IgG/IgM 的含量成正比，IgG/IgM的含量可以通过标准曲线获得。 1 SN/T 2609—2010 4试验材料 4.1试剂 4.1.1包被板：分别包被有甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒抗原的96孔 板，可拆。 4.1.2酶标抗人IgG/IgM抗体。 4.1.3TMB底物液。 4.1.4终止液（1mol/LH2SO4）。 4.1.5洗涤液：PBS-T缓冲液。 4.1.6稀释液：PBS缓冲液。 4.2检验对象 在国际旅行卫生保健中心体检的入出境人员，国境口岸可疑流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病 毒感染者，或申请检验的人员。 4.3待检血清 无菌采集检验对象静脉血2mL~3mL，自然凝固1h~2h，1500g~2000g离心5min，收集血清 于2mL无菌螺口塑料管中。 5设备 5.1酶联检测仪（能在450nm处读数）。 5.2洗板机。 5.3普通冰箱（4℃和-20℃）。 5.4普通台式离心机。 唯信息服务平台 5.5微量可调移液器及配套吸头：10μL、100ul、1000μL 5.6 2mL无菌螺口塑料管。 涡旋器。 5. 8 Ⅱ级生物安全柜。 5. 9 恒温培养箱。 6 实验室检测 6.1方法提要 6.1.1操作过程 在包被有抗原的固相包被板上，用特异性抗人IgG/IgM的酶标二抗检测结合到包被板上的样品中 的特异性IgG/IgM抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与样品中IgG/IgM的含量成正比，IgG/IgM 的含量可以通过标准曲线获得。 6.1.2待检血清的稀释和处理 根据所用试剂盒的要求，将血清标本用稀释缓冲液稀释成不同浓度，加入不同比例的类风湿因子 2