SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1870—2016 替代SN/T1870—2007 出口食品中食源性致病菌检测方法 实时荧光PCR法 Method for the detection of pathogens in food for export- Real-time PCR method 行业标准信息服务平台 2016-03-09发布 2016-10-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1870—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准参考美国FDA细菌学分析手册第二十 九章 阪崎克罗诺杆菌2012（Chapter 29：Cronobacter 2012of FDABacteriological Analytical Manual)，对原标准文本格式、某些文字表述和文本内容进行修订。 本标准代替SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法 实时荧光PCR法》 本标准与SN/T1870—2007相比主要变化如下： 增加了阪崎克罗诺杆菌的实时荧光PCR检测方法。 增加了DNA浓度和纯度的测定。 修改了实时PCR反应体系。 删除了“测定低限”。 防止交叉污染的措施改为“按照SN/T1193的规定执行"并删除附录B。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫 局、深圳太太基因工程有限公司。 本标准主要起草人：曹际娟、贾俊涛、倪长鹏、郑秋月、徐君怡、肖性龙、张经纬。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1870—2007。 行业标准信息服务平台 1 SN/T1870—2016 出口食品中食源性致病菌检测方法 实时荧光PCR法 1范围 本标准规定了食品中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏 菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、霍乱弧菌、阪崎克罗诺杆 菌、创伤弧菌和溶藻弧菌的实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏 菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、霍乱弧菌、阪崎克罗诺杆 菌、创伤弧菌和溶藻弧菌的快速检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB 4789.5 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验 食品安全国家标准 主食品微生物学检验 GB 4789.7 副溶血性弧菌检验 GB/T 4789.8 食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 食品安全国家标准食品微生物学检验 GB 4789.9 空肠弯曲菌检验 GB 4789.10 食品安全国家标准食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 食品安全国家标准 食品微生物学检验 GB 4789.30 单核细胞增生李斯特氏菌检验 食品安全国家标准 食品微生物学检验 GB 4789.40 阪崎肠杆菌检验 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测 SN/T 0973 进出口肉、肉制品以及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法 进出口食品中霍乱弧菌检验方法 SN/T 1022 息服务平台 NMKLNo.156 食品中致病性弧菌的检测和计数 3术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本文件。 3.1术语和定义 3.1.1 实时荧光PCRrealtimePCR 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。 1 SN/T 1870—2016 3.1.2 Ct 值cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 3.2 缩略语 Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数（C：Cycle，t：threshold） dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate） dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid） dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate） dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidinetriphosphate） dUTP：脱氧尿苷三磷酸（deoxyuridinetriphosphate） FAM:6-羧基荧光素（6-carboxyfluorescein) PCR：聚合酶链式反应，简称PCR（polymerasechainreaction） TAMRA：6-羧基四甲基罗丹明（6-carboxytetramethylrhodamine） Taq：水生栖热菌（Thermusaquaticus） Tris：三（羟甲基）氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane UNG：尿嘧啶N-糖基化酶（uracilN-glycosylase） 4方法提要 在PCR基础上，加入一条与模扳DNA匹配的、两端有荧光基团标记的寡核苷酸探针。PCR每进 行一次循环，合成的新链数与释放的荧光基团数呈对应关系，即PCR产物的量与荧光信号的强度呈对 应关系。当荧光信号超过所设定的阈值（Threshold-value)时，荧光信号可被检测出来，仪器检测荧光基 团的增加量可以间接地体现目的片段的扩增量 样品的模板DNA进行实时荧光PCR扩增，观察实时PCR的增幅曲线，从而对食品中的致病菌进 业标准信息服务平台 行快速检测。 5仪器和设备 5.1实时荧光PCR仪。 5.2离心机：离心转速12000r/min 5.3微量移液器：10μL、100μL、200μL、1000μL。 5.4恒温培养箱。 5.5高压灭菌器。 5.6核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。 5.7恒温水浴锅。 5.8 3天平：感量0.01g。 6试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。所有试 2