SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0331—2013 代替SN0331—1994 出口畜产品中炭疽杆菌检验方法 Method for the inspection of bacillus anthrax in animal by-products for export 行业标准信息服务平台 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 0331—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN0331一1994《出口畜产品中炭疽杆菌检验方法》 本标准与SN0331一1994相比，主要技术性变化如下： 删除了大豆凝集素吸收实验、噬菌体裂解试验、串珠实验和动物实验； 增加了膜染色、Ascoli反应和聚合酶链反应（PCR）试验 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：王海艳、敖威华、赵治国、赵林立、郭铁筝、冯永胜 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN0331—1994。 行业标准信息服务平台 SN/T 0331—2013 出口畜产品中炭疽杆菌检验方法 1范围 本标准规定了出口畜产品中炭疽杆菌的检验 本标准适用于出口繁、毛、绒、野生动物毛皮、生骨粒及其他畜产品中炭疽杆菌的检验 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 3生物安全 炭疽为人畜共患病，试验环境和防护要求按照GB19489执行。 4 培养基和试剂 4.1无菌脱纤绵羊血（或马血）。 4.2炭疽沉淀素标准抗原。 4.3炭疽沉淀素阳性血清。 4.4 炭疽沉淀素阴性血清。 4.5 4.6普通营养肉汤：见A.2。 4.7 普通营养琼脂平板：见A.3。 戊烷多粘菌素琼脂平板：见A.4。 4.9 PLET琼脂平板：见A.5。 4.10 碱性美蓝染色液：见A.6。 4.11 革兰氏染色液：见A.7。 4.12 洗样液：见A.8。 4.13 0.5%石炭酸生理盐水：见A.9。 4.14 电泳级琼脂糖粉。 4.15 5TaqDNA聚合酶：5U/μL。 4.16 100bpDNAladderMarker（脱氧核糖核酸分子量标准）。 4.1710倍浓度TaqDNA聚合酶缓冲液（10XTapBuffer）：15mmol/LMgCl。 4.18 dNTP混合物：脱氧腺苷三磷酸（dATP）、脱氧胸苷三磷酸（dTTP）、脱氧鸟苷三磷酸（dGTP）、脱 氧胞苷三磷酸（dCTP）各2.5mmol/L。 4.1950XTAE电泳缓冲液：见A.10。 4.20 6X加样缓冲液：见A.11。 1 SN/T 0331—2013 4.21 漠化乙锭溶液：见A.12。 5 设备和材料 5.1恒温培养箱。 5.2 2二氧化碳培养箱。 5.3恒温水浴箱。 5.4生物显微镜。 5.5Ascoli反应管（小试管，内直径约0.5cm左右）。 5.6 高压灭菌器。 5.7 微量加样器。 5.8高速冷冻离心机。 5.9 PCR 仪。 5.10 水平凝胶电泳槽。 5.11电泳仪。 5.12 凝胶成像系统。 6 细菌学检测 6.1抽样 6.1.1鬃、毛、绒和生骨粒 按生产日期或原料来源划分批次，每批按30%开包（箱）抽样或在扎包（装箱）时由每包（箱）各取 份样品。无菌从每包（箱）的不同部位共抽样3g～5g，装进灭菌的棉布袋内，将袋口扎紧，作上批次标 记。将样品装人塑料袋或铁筒内，密封后送样。 6.1.2动物皮张 应逐张取样，用灭菌棉拭子涂擦样皮的真皮面。将棉拭子插人试管，塞紧棉塞。将试管逐支用纸包 6.2样品处理 6.2.1鬃、毛、绒和生骨粒 6.2.1.1可以根据样品多少，将适合数量的同批样品（最多不超过10份）合编为一个检验样品单位，作 好记录。从合编为一个检验样品单位的每个样品袋中各取1g～2g样品，一起放人一个适当大小的灭 菌三角瓶中。 冰水浴或0℃~4℃冰箱内,间或摇动约1h。 6.2.1.3将瓶中洗样液倒入500mL灭菌离心管中，盖住管口，以3000r/min离心20min。弃去上清 液，加少许灭菌水，使沉淀均匀悬浮。将离心管静置5min10min，待杂质下沉后，将上悬液移人另 支灭菌试管内，于65℃恒温水浴加热30min。 6.2.1.4加洗样液后的样品于热处理前如不能及时检验，应贮存于0℃～4℃冰箱内，以防芽孢发芽。 2