SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4104—2015 猪支原体肺炎检疫技术规范 Quarantine protocol for Mycoplasma hyopneumoniae 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4104—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检 疫局、重庆动物疫病预防控制中心、西南大学、重庆正大有限公司。 本标准主要起草人：聂福平、杨俊、张强、李应国、曾政、王昱、肖进文、程光胜、王豪举、夏明星。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4104—2015 猪支原体肺炎检疫技术规范 1范围 本标准规定了猪支原体肺炎的病理学诊断方法、病原分离和鉴定方法、间接血凝试验、酶联免疫吸 附试验、聚合酶链式反应试验。 本标准适用于猪支原体肺炎的检疫、诊断、流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 WS233—2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪支原体肺炎（Mycoplasmahyopneumoniae） 猪支原体肺炎又称猪气喘病，猪地方流行性肺炎，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性呼吸系统传 染病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。该病以咳嗽和气喘为主要临床特征，病变部位主要在 肺部，可见心叶、中间叶和尖叶有融合性支气管肺炎变化。该病广泛流行于世界各地，欧洲、亚洲、美洲 以及大洋洲等主要养猪国家和地区均有发生。 4 实验室生物安全要求 4.1 检测工作中的个人防护参照GB19489。 4.2实验室应遵循GB19489和WS233—2002对生物安全2级（BSL-2）实验室的生物安全要求。 4.3 使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。 5临床和病理学诊断 5.1临床症状 猪支原体肺炎是一种发病率高死亡率低的慢性呼吸道传染病，主要临床症状为慢性干咳。新发病 猪群常呈急性，张口喘气，挛性阵咳，体温升高不明显。咳嗽持续几周甚至数月，育肥猪咳嗽最严重。 部分患猪呈腹式呼吸，喘息沟明显。患猪食欲减退，消瘦，被毛粗糙，生长停滞。该病病程主要分急性、 1 SN/T 4104—2015 慢性两种类型。 5.2病理学特征 主要病变见于肺、肺门淋巴结和纵隔淋巴结。急性死亡患猪肺有不同程度的水肿和气肿。肉眼病 变类似于膨胀不全的肺，尤其在疾病的慢性阶段。特征性病变是两肺的心叶、尖叶和隔叶前缘发生对称 性的实变，肺门淋巴结肿大，肺中间叶实变，以及肺门淋巴结肿大、增生。病变最初为栗粒大至豆大呈均 匀散布，逐渐扩展而融合成支气管肺炎。病变部界限明显，灰白色，无弹性，呈“胰样”“鱼肉样”。切开 时，内有大量泡沫。其他器官无明显变化。 5.3病理组织学检查 典型病变组织通过常规的病理学检查，支气管和细支气管上皮组织纤毛数量减少，小支气管周围的 肺泡扩大，泡腔充满多量炎性渗出物，肺泡间组织有淋巴样细胞增生。急性病例中，扩张的泡腔内充满 浆液性渗出物，杂有单核细胞、中性粒细胞、少量淋巴细胞和脱落的肺泡上皮细胞。慢性病例中，其肺泡 腔内的炎性渗出物中主要是淋巴细胞浸润。 5.4X线检查 X线检查对本病的诊断有重要价值，对可疑患猪进行X线透视，可做出诊断。在X线检查时，猪只 以直立背胸位为主，侧位或斜位为辅。病猪在肺野的内侧区以及心膈角区呈现絮状及片状阴影， 6病理分离和鉴定 6.1材料准备 6.1.1 A26肉汤：制备方法见附录A。 6.1.2 固体培养基：制备方法见附录A。 6.1.3 庆气肉肝汤：制备方法见附录A。 6.1.4J 血琼脂平板：按GB4789.28的方法配制。 6.1.5 Hank's液：配制方法见附录A。 6.1.6 0.25%鸡红细胞液：制备方法见附录A。 6.1.7 灭菌干棉拭子。 6.2 病料采集 6.2.1 活体病料采集：用棉拭子深擦拭病猪的喉头或鼻腔，采集呼吸道分泌物 私服务 6.2.2死后病料采集：无菌采取病键交界处肺组织。 6.3 病原分离 将病肺组织剪成小于2mm的碎块，浸人Hank's液中洗涤，除去血液和组织碎块，取3块～5块 浸泡在盛有5mLA26肉汤的试管中；棉拭子浸入10mLA26肉汤中清洗，并压出棉花中残液，再经 0.45um的滤膜过滤除菌，将滤液分装于试管中。将上述试管置于含5%~10%CO2环境或用胶塞塞 紧管口，在37℃下进行培养。1代～3代分离时，须每经3d～5d，以20%的接种量连续进行移植；4代~ 5代以后，再经5d～7d连续转移以提高分离率。同时应设厌氧肉肝汤、血琼脂平板作为细菌检查的 对照， 通过连续传代，当培养物出现有规则的变化时，应涂片镜检；同时将液体培养物作适当稀释后再接 2