SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2855—2011 恶性卡他热检疫技术规范 Quarantine protocol for malignant catarrhal fever 行业标准信息服务平台 2011-05-31发布 2011-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2855—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准修改采用国际动物卫生组织（OIE)《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2009版）中2.4.15章 “恶性卡他热”部分。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：孙敏、梁成珠、孔繁德、郑小龙、高宏伟、邓明俊、林超、刘彩霞。 行业标准信息服务平台 SN/T 2855—2011 恶性卡他热检疫技术规范 1范围 本标准规定了恶性卡他热的临床诊断、病毒分离鉴定、间接荧光抗体试验、免疫过氧化物酶试验、病 毒中和试验、竞争抑制酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应等检疫方法的技术要求。 本标准适用于进出口牛，鹿、猪等多种动物恶性卡他热的检疫和诊断， 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 MCF(malignantcatarrhalfever)：恶性卡他热。 AIHV-1(alcelaphineherpesvirus-1)：猬羚疱疹病毒1型 OvHV-2（ovineherpesvirus-2）：绵羊疱疹病毒2型 PBS(phosphatebufferedsaline）：磷酸盐缓冲液 CPE(cytopathiceffect)：细胞病变效应 IgG(immunoglobulinG)：免疫球蛋白G TCIDso（50%tissuecultureinfectivedose）：半数组织培养感染量 PCR（polymerasechainreaction）：聚合酶链反应 DNA（deoxyribonucleicacid)：脱氧核糖核酸 dNTP（deoxyribonucleosidetriphosphate）：脱氧核糖核苷三磷酸 dATP（deoxyadenosinetriphosphate)：脱氧腺苷三磷酸 dCTP（deoxycytidinetriphosphate）：脱氧胞苷三磷酸 dGTP（deoxyguanosinetriphosphate）：脱氧鸟苷三磷酸 dTTP（deoxythymidinetriphosphate）：脱氧胸苷三磷酸 服务平台 bp(basepair）：碱基对 FITC（fluoresceinisothiocyanate）：异硫氰酸荧光素 DMSO(dimethyl sulfoxide)：二甲基亚矾 TBE：Tris（三羟甲基氨基甲烷）、硼酸、EDTA（乙二胺四乙酸）缓冲液 Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数 4临床诊断 4.1临床表现 从最急性到慢性型病例，恶性卡他热（MCF）的临床症状相差甚远。最急性病例，既无临床症状，也 1 SN/T 2855—2011 无精神沉郁，只在死前12h～24h可能出现腹泻和下痢。一般情况下，MCF病例症状是伴随着高热逐 步出现的，起初眼鼻流液，继之转变为黏脓性分泌物，病畜可能食欲下降，产奶量降低。特征性症状 包括： 一病畜双眼角膜从外周开始逐渐浑浊；有些病例可在会阴、乳房和乳头部，出现皮肤损害（主要表 现为溃疡和渗出），并可形成硬痴（与上皮坏死有关）。口腔充血、流涎，并逐步发展为舌、硬聘 和齿龈溃疡，颊乳头糜烂是其典型症状； 浅表淋巴结肿大，四肢关节肿大； 一出现感觉过敏、运动失调、眼球震颤等神经症状，在无其他症状时可能出现头颈部僵硬。 其他资料参见附录A。 4.2病理学变化 4.2.1解剖病理学变化包括： 一胃肠道可能有出血和糜烂，急性病例可出现肠道内容物带血； 一淋巴结肿大，但程度不一。淋巴结切开时，常见发白、硬化，有些可见颌下淋巴结和咽后淋巴结 出血甚至坏死； 一呼吸道可见卡他性炎症积液，糜烂和白喉膜生成； 一一泌尿道膀胱上皮层淤血性出血，肾皮质出现白色小坏死灶，直径约1mm～5mm，有时可被一 出血带包围。 4.2.2组织病理学变化：确诊MCF的基础。淋巴器官上皮变性，血管炎症、增生乃至坏死，非淋巴器 官间质广泛分布淋巴细胞是其特征性变化，如： 一所有上皮表面出现溃疡和糜烂，常伴发上皮和上皮内淋巴细胞浸润； 一常见大脑血管炎，血管外膜和膜介质出现淋巴细胞浸润，并常见类纤维变性。血管腔内可见淋 巴细胞贴壁，重病例可见内皮损伤和内皮下膜淋巴细胞集聚，有时可见血管堵塞； 淋巴结增生以副皮质淋巴样干细胞膨胀为特征，常伴发滤泡退行性病变，淋巴组织炎性水肿常 涉及周围组织； 一非淋巴组织特别是肾皮质和肝门静脉周围区的间质淋巴细胞集聚明显，脑内可能有非化脓性 脑膜炎、脑脊髓炎，伴随淋巴细胞周围的套状白细胞聚集及脑脊髓液中细胞成分增多； 角膜淋巴细胞浸润，从周边逐步向中心发展，随病程延长，发展为水肿和坏死。也可能出现脉 管炎、眼前房积脓和虹膜睫状体炎， 标准信息服务 5实验室诊断 5.1猬羚疱疹病毒1型（AIHV-1型） 5.1.1病毒分离 5.1.1.1设备和材料 生物安全柜、立式冷冻离心机、倒置光学显微镜、二氧化碳培养箱、高压灭菌锅蔡氏滤器和微孔滤 膜（0.22μm）、细胞瓶、细胞培养板、15mL离心管、组织研磨器、微量可调加样器及配套吸头（20μL和 200μL）、移液管 细胞：反鱼动物源的大多数原代或低代细胞都可用于AIHV-1的病毒分离，常用牛甲状腺细胞 5.1.1.2试剂 DMEM培养基或其他培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素及其他常规试剂，配制方法见附录B。试 2