SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2693—2010 代替SN/T1526—2005 马焦虫病检疫规范 Quarantineprotocolfor Equinepiroplasmosis 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2693—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1526一2005《马巴贝斯虫病检测方法：微量补体结合试验方法》。 本标准与SN/T1526一2005相比，主要技术变化如下： 增加了马焦虫病的血液涂片镜检； 增加了间接荧光抗体试验； 增加了酶联免疫吸附试验。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局， 本标准主要起草人：王玉玲、陈本龙、柴铭骏， 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1526—2005。 行业标准信息服务平台 I SN/T2693—2010 马焦虫病检疫规范 1范围 本标准规定了马焦虫病的血涂片镜检、间接荧光抗体试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验等技 术要求。 本标准适用于马属动物的马焦虫病检疫、诊断和血清学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3概述 参见附录A。 4临床症状与病理变化 行业标准 参见附录B。 5# 被检血清样品采集 5.1采血和分离 按常规方法采血和分离血清。血清应新鲜，无明显蛋白凝固、无溶血、无腐败气味。 5.2运送和保存 防止血清冻结和受热，若3d内不能送到实验室，应采用冷藏方法运送。血清应放至4℃冰箱内保 存备用。 实验室诊断 6.1血涂片镜检 6.1.1( 仪器和设备 普通显微镜。 6.1.2 试剂和材料 6. 1. 2. 1 姬姆萨染色液，配制方法参见附录C。 1 SN/T2693—2010 6.1.2.2载玻片：处理方法参见附录C。 6.1.3操作步骤 6.1.3.1血涂片制备 无菌采集动物血液，取50μL滴于载玻片的一端约三分之一处，以一端边缘光滑的载波片为推片， 将推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片端缘扩散后，自右向左推成薄血膜。将血涂片置空气中干 燥，用铅笔在载玻片的标签上编号，注明制片日期。 6.1.3.2血涂片染色 将制备好的血涂片80℃热固定5min，再用5%姬姆萨染液染20min~30min。染色后涂片用自 来水冲洗3次～4次，以除去附着的染料，但不能超过5s，否则样本会脱色。将血涂片空气干燥，先用 低倍镜（如10×10）观察，再用100倍油镜下观察红细胞内是否有马焦虫裂殖子。 6.1.4结果判定 6.1.4.1若见红细胞内的裂殖子呈梨籽形，长2um～5μm，直径1.3μm～3.0μm；成对裂殖子两尖 端连接成锐角（参见附录D），则可确诊此动物为驾巴贝斯虫感染，判定该动物感染马焦虫病。 6.1.4.2若见红细胞内裂殖子相对较小，长度小于2um～3um，呈圆形或阿米巴样；成对的裂殖子尖 此动物为马巴贝斯虫感染，判定该动物感染马焦虫病。 6.1.4.3若未见有6.1.4.1和6.1.4.2所描述特征的裂殖子，则宜借助其他试验进一步确诊 6.2间接荧光抗体试验 6.2.1仪器和设备 行业标准信息服务平台 6.2.1.1台式离心机。 6.2.1.2冰柜：-80℃。 6.2. 1. 3 磁力搅拌器。 6.2.1.4荧光显微镜。 6. 2. 1. 5 微量移液器。 6.2.2试剂和材料 6.2.2.1PucksSalineG溶液（pH7.2）配制方法参见附录E。 6. 2. 2. 2 山羊血清。 6. 2. 2. 3 丙酮，分析纯。 6.2.2. 4 阳性对照血清。 6. 2. 2. 5 阴性对照血清。 6.2. 2. 6 0.01mol/LpH7.4PBS配制方法见附录E。 6. 2. 2. 7 FITC荧光素标记的羊抗马IgG。 6.2.2.8 真空管：容积15mL。 6. 2.2.9 载玻片。 6.2.2. 10 粘质纸带。 6. 2. 2. 11 锡箔纸。 6.2.2.12 干燥缸。 2