SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2539—2010 动物源食品中乙氧喹啉残留量的 测定方法 高效液相色谱法 Determination of ethoxyquin residues in foodstuffs of animal origin- HPLC method 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2539—2010 前言 本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：颜鸿飞、张莹、孙菲、胡宇东、黄志强、付善良、李拥军、王美玲。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 行业标准信息服务平台 I SN/T 2539—2010 动物源食品中乙氧喹琳残留量的 测定方法 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鱼肉、鸡蛋、蜂蜜、牛奶中乙氧喹残留量的液相色谱测定和 高效液相色谱-质谱确证方法。 本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鱼肉、鸡蛋、蜂蜜、牛奶中乙氧喹啉残留量的测定和确证。 2方法提要 试样加碳酸钠溶液和丙酮振荡提取后，用正已烷进行液-液萃取分配，提取液经浓缩定容后，用配 荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量，高效液相色谱-串联质谱仪确证。 3试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 3.1丙酮:HPLC级。 3.2正已烷：HPLC级。 3.3乙睛:HPLC级。 3.4碳酸钠。 3.5乙酸铵：色谱纯。 3.6碳酸钠溶液（100g/L）：准确称取100g碳酸钠（3.4）于烧杯中加人适量水溶解，转移至1L容量 瓶，定容至刻度，摇匀。 3.7乙酸铵溶液（20mmol/L）：称取1.54g乙酸铵（3.5），溶解于1L水中。 3.8乙氧喹啉标准物质（ethoxyquin，CAS编号：91-53-2，CuH1gNO）：纯度大于等于98.0%。 3.9乙氧喹啉标准储备溶液：准确称取适量标准品，用乙腈稀释配制成100ug/mL的标准储备液，0℃～ 4℃下暗处保存。 3.10乙氧喹啉标准工作液：根据检测需要移取一定体积的标准中间溶液用乙睛逐级稀释成适当浓度 信息服务平台 的标准工作溶液。标准工作溶液需现配现用。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器（(FLD) 4.2 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI） 4. 3 组织捣碎机。 4.4离心机：6000r/min。 4.5涡旋混匀器。 4.6 旋转蒸发仪 4.7 分析天平：感量0.0001g和0.01g。 4.8 氮气浓缩仪。 4.9 有机滤膜：0.45μm。 SN/T 2539—2010 5试样制备与保存 5.1试样制备 5.1.1肉及动物内脏 取有代表性样品500g，将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器 内，密封并标明标记。 5.1.2蜂蜜及牛奶 取有代表性样品500g，倒入洁净的塘瓷混样桶中，充分搅拌均匀，装人洁净的盛样容器内，密封并 标明标记。 5.2试样保存 蜂蜜试样于4℃保存；牛奶、肉及内脏制品等试样于一18℃下冷冻保存。在制样的操作过程中，应 防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取与净化 称取2g均匀试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心试管中，加人5mL碳酸钠溶液（3.6)置于涡 旋混匀器上混匀2min，加人5mL丙酮（3.1)置于涡旋混匀器上振荡2min，加人15mL正已烷（3.2）， 在涡旋混勾器振荡提取2min，6000r/min离心3min，取上层正已烷层于200mL鸡心瓶中，用15mL 正已烷再重复提取两次，合并正已烷层于鸡心瓶中，将提取液于30℃水浴下旋转浓缩至约1mL，用平 缓氮气流吹至近干，用乙睛溶解并定容至1.0mL，过滤膜后供高效液相色谱仪测定和高效液相色谱-串 联质谱仪确证。 6.2测定 6.2.1 高效液相色谱测定条件 a) 色谱柱：Cis，150mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者； b) 色谱柱温度：25℃； c) 流动相：乙酸铵水溶液（20mmol/L）+乙腈=（7+3）（V/V）； d) 荧光检测器：激发波长360nm，发射波长435nm； e) 流速：0.50ml/min; f) 进样量：10μL。 6.2.2 高效液相色谱-串联质谱仪测定条件 6. 2. 2. 1 高效液相色谱条件 a) 色谱柱：Cis，150mm×4.6mm（内径）5μm或相当者； b) 色谱柱温度：25℃； c) 流速：0.50mL/min； d) 梯度洗脱程序：见表1； 表 1 高效液相色谱-串联质谱仪梯度洗脱程序 时间/min 流速/(mL/min) 5mmol/L乙酸铵水溶液/% 乙腈/% 0 0.5 60 40 0. 5 40 3 60 6 0. 5 10 90 0. 5 10 9 90 11 0. 5 60 40 14 0. 5 40 60 e) 进样量：5uL。 2