SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2327—2009 进出口动物源性食品中角黄素、 虾青素的检测方法 Determination of canthaxanthin and astaxanthin in foods of animal origin food for import and export 行业标准信息服务平台 2009-07-07发布 2010-01-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2327—2009 前言 本标准附录A、附录B和附录C均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：余孔捷、钱疆、刘正才、杨方、黄杰、李耀平、李捷。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2327—2009 进出口动物源性食品中角黄素、 虾青素的检测方法 1范围 本标准规定了进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的高效液相色谱检测与液相色谱-质谱/质谱 确证法。 本标准适用于黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸡蛋、鸭肝、猪肾和牛奶中角黄素、虾青素的测定与确证。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准、 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样用乙睛提取，正已烷脱脂、浓缩后，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。如有必要可用液相 色谱-质谱/质谱法确证。 4试剂和材料 所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2正已烷：色谱纯。 4.3 正丙醇。 4.4甲酸。 4. 5 2,6-二叔丁基对甲酚（BHT)：化学纯。 4.6 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于干燥器内，冷却后备用。 4.7乙酸铵。 4.8乙腈提取剂：0.25gBHT溶解于500mL乙。 4.9BHT-乙腈溶液：5gBHT溶解于500mL乙睛。 4.10 ）乙酸铵溶液（5mmol/L，含0.2%甲酸）：称取0.38g乙酸铵用水溶解稀释后，加2.0mL甲酸， 加水至1.0L 4.11角黄素标准品：canthaxanthin，CAS:514-78-3，纯度大于等于90%，于4℃避光贮存。 4.12虾青素标准品：astaxanthin，CAS：472-61-7，纯度大于等于90%，于-18℃避光存 4.13标准储备液：分别准确称取适量（相当于5.00mg纯品，精确至0.01mg）角黄素，虾青素标准品， 分别加入BHT-乙睛溶液（4.9）溶解，定容于200mL棕色容量瓶，配制成浓度为25.0μg/mL的标准储 备液。充氮气置一18℃避光保存，可使用两周。 4.14混合标准工作液：分别准确移取摇匀的角黄素、虾青素标准储备液，混合，用乙睛准确稀释成适宜 浓度，即配即用。 1 SN/T23272009 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列(DAD)或紫外-可见(UV-Vis)检测器。 5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾（ESI)离子源。 5.3分析天平：感量0.01mg，0.01g。 5.4旋涡混合器。 5.5超声提取器。 5.6 5离心机：5000r/min。 5.7旋转蒸发器。 5.8微孔滤膜：0.22μm，有机系。 6试样制备和保存 6.1黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸭肝、猪肾 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用高速组织捣碎机充分捣碎、混匀。 6.2鸡蛋 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分药500g（生蛋应煮熟冷却后剥壳），用高速组织捣碎 机充分捣碎、混匀。 6.3牛奶 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混匀，置于合适洁净容器 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生角黄素、虾青素含量的变化，制样温度不应高于30℃， 制样后应立即测定。需存放的试样应密封于洁净容器、避光、于一18℃以下冷冻存放。 7测定步骤 7.1提取与净化 称取试样约5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入30mL乙睛提取剂（4.8）及10g无水硫酸 钠（4.6）后，涡旋混合1min，在35℃以下水浴超声提取10min，再以3000r/min离心5min。将上清液 移入预置有20mL正已烷的125mL分液漏斗中，振摇0.5min后，静置分层；收集下层乙睛相，正已烷 相留在分液漏斗，待本试样后续脱脂重复使用。 按上述步骤对离心管中的残留物每次用20mL乙睛提取剂再重复提取两次，所得提取液用上述正 干，用乙睛溶解并定容至5.0mL，0.20μm滤膜过滤，滤液待测 测定操作应避强光、连续进行。 7.2高效液相色谱法测定 7.2. 1 色谱条件 a）色谱柱：WatersSymmetryCis，4.6mm（内径）×250mm，5μm，或相当者 b) 柱温：35℃； c) 流动相：乙睛-水（95十5，体积比）； d) 流速：1.0mL/min; e) 检测波长：471nm； 进样量：50μL。 7.2.2色谱测定 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和待测 样液中角黄素、虾青素的响应值应在仪器线性响应范围内。标准工作液与待测样液等体积进样。在上 2