SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1395—2015 代替SN/T1395.1—2004,SN/T1395.2—2005,SN/T1395.3—2005 禽衣原体病检疫技术规范 Quarantine protocol for avian chlamydiosis 行业标准信息服务平台 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1395—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1395.1—2004《禽衣原体间接红细胞凝集试验方法》、SN/T1395.2—2005《禽衣 本标准与SN/T1395.1—2004、SN/T1395.2—2005和SN/T1395.3—2005相比，主要技术变化 如下： 整合了SN/T1395.1—2004、SN/T1395.2—2005、SN/T1395.3—2005内容并修改了标 准名称。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘小丛、陈进会、伍彦、朱道中、林志雄、吴晓薇、梁刚、颜思通 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1395.1—2004; —SN/T1395.2—2005; SN/T1395.3—2005。 行业标准信息服务平台 1 SN/T1395—2015 禽衣原体病检疫技术规范 1范围 体结合试验。 本标准适用于禽类衣原体病抗体的血清学检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3概述 禽衣原体病相关资料参见附录A。 4样品采集 本试验检测样品为禽鸟类动物血清。样品应无菌采集，且不溶血、不腐败。样品4℃时可保存5d， 长期存样应-18℃冷藏保存，试验前56℃水浴灭能30min~35min。 行业标准信息 5 实验室诊断 5.1 间接红细胞凝集试验 5.1.1设备、试剂及材料 5.1.1.1 主要设备 恒温水浴箱，96孔V型微量反应板，25μL、50μL微量移液器，微量振荡器，超净工作台，恒温培养 服务 箱，高压灭菌锅，台式离心机 5.1.1.2 2稀释液 含1%灭能兔血清的pH7.0磷酸缓冲液（PBS），配制方法见附录B,或按诊断试剂说明书配制。 5.1.1.3 诊断试剂 敏化红细胞，即经衣原体抗原敏化的绵羊红细胞，标准阳性血清，标准阴性血清。（商业购买） 5.1.2操作方法 每份被检血清倍比稀释至第6孔，每次检测设一对照试验组，包括敏化红细胞空白对照、阳性及阴 1 SN/T1395—2015 性血清对照试验，试验操作程序见表1。 被检血清检测程序如下： 每孔滴加稀释液50μL； 将被检血清50μL加人第1孔，依次作倍比稀释至第6孔，最后弃去50μL； 每孔加入敏化红细胞25μL； 置反应板于微量振荡器上振荡1min，混匀； 将反应板加盖，37℃或室温感作30min～120min，以对照孔出现结果时判读。 表1禽衣原体间接红细胞凝集试验操作程序及结果判定举例 单位为微升 被检血清稀释度 各项对照试验 成分 阳性血 阴性血 1 : 2 1 : 4 1:8 1:16 1:32 1: 64 空白对照 清对照 清对照 稀释液 50) 50) 50) 50) 50) 50) 50 -50J 被检血清 50J 50 50 -50 50 弃去50 阳性对照血清 50 阴性对照血清 50 敏化红细胞 25 25 25 25 25 25 25 25 25 置反应板于微量振荡器上振荡1min，37℃或室温感作30min~120min 结果判定举例++++ ++++ ++++ +++ ++ 注：所示被检血清红细胞凝集效价为1：32 5.1.3结果判定 5.1.3.1凝集程度的判别标准和红细胞凝集效价 5.1.3.1.1凝集程度的判别标准 十十十十：红细胞全部凝集，成一均匀的膜，布满整个孔底。 十十十：红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者小。 十十：红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状。 十：红细胞在孔底呈小圆点，周围有稀疏散在的少量凝集。 慧服务平台 士：红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。 一：红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。 5.1.3.1.2红细胞凝集效价 被检血清产生“十十”红细胞凝集现象的最高稀释倍数为红细胞凝集效价。 5.1.3.2 结果判定 5.1.3.2.1 对照试验 敏化红细胞空白对照：应无自凝现象，为（一）。 阳性对照血清：应为（十十十十）。 阴性对照血清：应为（一）。