SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1135.13—2015 马铃薯Y病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Potato virus Y 行业标准信息服务平台 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1135.13—2015 前言 SN/T1135共分为13部分： 第1部分：马铃薯癌肿病检疫鉴定方法； 第2部分：马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法； 第3部分：马铃薯帚顶病毒检疫鉴定方法； 一第4部分：马铃薯黑粉病菌检疫鉴定方法； 第5部分：马铃薯环腐病菌检疫鉴定方法； 第6部分：马铃薯排腐病菌检疫鉴定方法； 第7部分：马铃薯A病毒检疫鉴定方法； 第8部分：马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法； 第9部分：马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法； 第10部分：马铃薯V病毒检疫鉴定方法； 第11部分：马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法； -第12部分：马铃薯M病毒检疫鉴定方法； 第13部分：马铃薯Y病毒检疫鉴定方法。 本部分为SN/T1135的第13部分 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民 共和国厦门出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：刘洪义、刘忠梅、张永江、李桂芬、王宏毅、魏梅生、周志强、张洪祥、杨立群。 行业标准信息服务平台 SN/T1135.13—2015 马铃薯Y病毒检疫鉴定方法 1范围 SN/T1135的本部分规定了马铃薯Y病毒（PotatovirusY)的检疫鉴定方法 本部分适用于可能带有马铃薯Y病毒的马铃薯植株、繁殖材料及其他寄主植物的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB7331马铃薯种薯产地检疫规程 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 马铃薯Y病毒基本信息 3 学名：Potato virusY 缩写：PVY 异名:Potato severe mosaic virus,Potato acropetal necrosis virus,Solanum virus 2,Tobacco vein- banding virus,Potato leafdrop streak virus,Tobacco veinal necrosis virus,Potato virus 2o。 分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyuiridae），马铃薯Y病毒属（Potyvirus）。 传播途径：马铃薯种薯传毒，机械接种可传毒，多种蚜虫以非持久性方式传播该病毒。远距离传播 通过种薯贸易完成。 马铃薯Y病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 PVY的基因组特征、免疫原性和在寄主植物上的症状特征是该病毒检疫鉴定的依据。依据PVY 及主要株系的基因组特征建立RT-PCR，实时荧光RT-PCR（Real-timePCR)检测方法；依据PVY及主 要株系的免疫原性建立酶联免疫吸附（ELISA）方法、胶体金免疫试纸条方法和免疫电镜方法：依据 PVY及主要株系在不同寄主植物上的症状特征建立鉴别寄主诊断法；通过这些方法的有效组合，判断 样品是否带有PVY及主要株系。 5 仪器设备、用具及试剂 5.1 仪器设备 酶标仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、生物安全柜、小型离心机、台式冷冻离心机、水浴锅、凝 胶成像系统、制冰机、超低温冰箱、常规冰箱、电子天平、涡旋振荡器、组织捣碎机、恒温培养箱等。 5.2用具 可调移液器（0.1μL~2.5μL，2μL~20μL，10μL~100μL，20μL~200μL100μL~1000μL）和 1 SN/T 1135.13—2015 可调移液器头、离心管、研钵、微型磨杆。 5.3试剂 双抗体夹心酶联免疫吸附测定所需试剂见附录B，免疫层析试纸条检测所需试剂见附录C，RT PCR检测所需试剂见附录D,实时荧光RT-PCR检测所需试剂见附录E。 6样品的抽取及制备 6.1抽样 马铃薯贸易商品或科研用薯材料或国际间种质交流材料等现场抽样按照SN/T2122的规定执行， 田间调查采样按照GB7331的规定执行。 6.2脱毒苗、微型薯、块茎等样品的制备 将脱毒苗、微型薯、块茎播于非土介质或灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出 3片～4片真叶后将表现症状的植株单独编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。 6.3茄科等寄主植物种子样品的制备 将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子）播于灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出 3片～4片真叶后将表现症状的植株单独编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。 7实验室鉴定 7.1西 酶联免疫吸附测定 见附录B。如选用合格的试剂盒，按试剂盒说明操作。 7.2胶体金免疫层析试纸条检测 见附录C。如选用不同生产商的合格产品，按其操作说明操作。 业标准信息服务平台 7.3 RT-PCR检测 见附录D。 7.4 实时荧光RT-PCR检测 见附录E。 7.5免疫电镜检测 按照SN/T1840的规定执行。 7.6 6鉴别寄主检测 见附录F。 8结果判定 8.1无可疑症状的样品，经PVY特异性的血清学检测（7.1、7.2任选一种）或分子检测（7.3、7.4任选 一 2